在运用羊elisa试剂盒测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前常用的方法。其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白igg、igm),再经孵育洗涤后,加底物显色,底物降解的量,即为欲测抗体的量,其结果可用目测或用分光光度计定量测定。
今天咱们来聊聊会影响羊elisa试剂盒实验结果的因素:
1、操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18c~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,要先查看水育箱温度,是否符合要求。
2、显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,以免显色过强。
3、手工洗板加洗液时冲击力不要太大,洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数,洗液在反应孑l内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑l间窜流,造成孔问污染,导致假阴性或假阳性。
4、要保证加液量一致,在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一,判断错误。
5、正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂,避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要清洗干净,避免污染,加样次序要与说明书一致,否则可导致结果错误,实验重复性差。
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关键词:分光光度计