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实时荧光定量PCR技术在卫生应急中的应用

实时荧光定量pcr技术(real-time quantitative polymerase chain reaction简称real time pcr,如果用于rna检测,这被称为逆转录实时pcr即real-time rt-pcr)是实时pcr法,它是指对dna或经过反转入(rt-pcr)的rna通过聚合酶链式反应并实时监测dna的放大过程,在扩增的指数增长期就测量扩增产物,因为扩增指数增长期测量值与特异dna(rna)起始量存在相关性,从而实现定量检测。
real time pcr的基本目标是测量和鉴别非常微量的特异性核酸,从而可通过监测ct值而实现对原始目标基因的含量定量。目前被普遍使用的多种常规pcr方法如各种凝胶电泳pcr法,终点荧光定量法或pcr-elisa法叫做终点pcr法。实时荧光定量pcr法大的点是克服了终点pcr法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差,实现dna/rna的定量。
普通pcr技术发明于1983年,而实时荧光定量pcr技术发明于上世纪九十年代并于1996年生产出了上第台实时荧光定量pcr仪,实时荧光定量pcr技术得以实现的技术要素主要有荧光定量pcr试剂盒和实时荧光定量pcr仪,我荧光定量pcr试剂盒研发实力强大,生产厂较多,临床诊断的品种如hbv/hcv及诊断试剂盒性能良、供应充足,基本实现产化。在猪流感病毒rna核酸序列明确的情况下,利用现有的试剂研发平台,人感染猪流感实时荧光定量pcr诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量pcr仪由于技术含量,只有少数几中企业有能力生产如西安天隆科技有限公司生产的tl-988系列仪器不但取得了发明、科学技术奖、重点新产品证书、医疗器械注册证,而且被确立为技术产业化示范工程2008年生物医学工程专项,产品性能达到际先进水平,在乳品检测行业*比进口仪器还[1-3]。实时荧光定量pcr仪应用广泛,1999年开始,西方发达尝试将pcr应用于临床传染病诊断、食品安全检测以及血液筛查,目前已相当普及。2008年12月13日中卫生部下发《卫生应急队伍装备参考目录》(卫办应急发[2008]207号),其中要求县以上卫生应急队伍建设中必须配备pcr仪和实时荧光定量pcr仪作为传染病控制类装备。
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