摘要:使用 agilent infinitylab poroshell 120 hilic-z 和 agilent infinitylab poroshell 120 hilic-oh5 色谱柱分析*及其代谢物。与 poroshell 120 hilic-oh5 相比， poroshell 120 hilic-z 色谱柱可提供更好的峰形和略高的灵敏度，但是保留性能较弱。本文使用 poroshell 120 hilic-z 色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。结果发现，在流动相中添加 10 mmol/l 乙酸铵可以获得峰形。
前言:*及其代谢物甜菜碱、乙酰*和甘油磷酰*属于小分子强极性季胺化合物，无法在反相色谱柱上保留。新开发的 hilic 化学键合相采用表面多孔颗粒填料技术，是保留这类化合物的理想选择。在本应用简报中，使用 infinitylab poroshell 120 hilic-oh5 和 agilent infinitylab poroshell 120 hilic-z 化学键合相色谱柱对*及其代谢物进行分离。使用 poroshell 120 hilic-z 色谱柱考察不同流动相添加剂的影响。agilent 6460 三重四极杆液质联用系统用于低浓度样品的检测。
实验部分:试剂与化学品所有试剂均为 hplc 级或更高等级。 hplc 级乙腈购自 j. t. baker (center valley, pa, usa)。水经由 elga purelab chorus 系统 (high wycombe, uk) 纯化。甲酸、乙酸、乙酸铵和氢氧化铵购自北京百灵威科技有限公司。*、甜菜碱、乙酰*和甘油磷酰*购自sigma-aldrich (st. louis, mo, usa)。标准溶液用 90:10 乙腈:水溶液配制而成，浓度为 0.5 nmol/l。
仪器与材料 • 色谱柱入口：agilent infinitylab quick connect 快速连接液相色谱接头（部件号 5067-5965） • 色谱柱出口：agilent infinitylab quick turn 液相色谱接头（部件号 5067-5966） • agilent captiva 经济型过滤器，ptfe 膜，直径 13 mm，孔径 0.2 µm（部件号 5190-5265） • 安捷伦样品瓶，螺口盖，棕色，带书写签，经认证，2 ml（部件号 5182- 0716） • 安捷伦固定螺口盖，蓝色，带 ptfe/ 红色硅胶隔垫（部件号 5190-7024） • agilent infinitylab 溶剂瓶，棕色， 1000 ml（部件号 9301-6526）agilent infinitylab stay safe 溶剂瓶安全盖，gl45，3 口，1 个放空阀（部件号 5043-1219） • eppendorf 移液器和连续分液器 • 超声仪 (vwr, radnor, pa, usa)
仪器 • agilent 1290 infinity ii 高速泵 (g7120a) • agilent 1290 infinity ii multisampler (g7167b) • agilent 1290 infinity ii mct (g7116b) • agilent 6460 三重四极杆液质联用系统 (g6460a) • agilent masshunter lc/ms 数据采集软件，版本 b.08.00 软件 agilent masshunter 定性分析软件，版本 b.07.00
结果与讨论:如图 2 所示，考察了不同的流动相添加剂。随着流动相 ph 值增加，乙酰*和*在 poroshell 120 hilic-z 色谱柱上的保留能力增强，但是响应信号稍有降低。当使用中性或碱性流动相时，它们的保留能力保持不变。然而，在中性 ph 值流动相条件下，乙酰*和甜菜碱的信号强度均比碱性条件下高。因此在流动相中添加 10 mmol/l 乙酸铵能够为四种化合物提供好的分离。
在相同中性 ph 值流动相的条件下，对比了两种 hilic 色谱柱的分离效果。 poroshell 120 hilic-oh5 色谱柱的分析结果显示所有化合物的保留性能均有所增强，出峰顺序发生改变，甜菜碱的灵敏度提高。然而，poroshell 120 hilic-z 色谱柱能够为关键分析物乙酰*和*提供更好的峰形。
结论总体来说，在中性 ph 值条件下使用添加乙酸铵的流动相以及 infinitylab poroshell 120 hilic-z 色谱柱可以实现*及其代谢物的分离。对另一种不同的 hilic 化学键合相（即 infinitylab poroshell 120 hilic-oh5）也同样进行了分离性能的评估。甜菜碱的灵敏度在 hilic-oh5 色谱柱上得到了提高，然而乙酰*和*的峰形和灵敏度在 hilic-z 色谱柱上更出色。