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茁彩生物通用的样本处理方法

茁彩生物通用的样本处理方法
土壤:
称取1g土壤,加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。
粪便:
称取1g粪便,加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。
*:
加入2g的ph7.2-7.4左右的pbs,溶解*头部,摇匀,用镊子取出*并挤干液体,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。
植物标本(精提):
1、称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本,在液氮中充分研磨;
2、加入1ml的提取液(80%甲醇),置于-20度过夜;
3、于4度,8000rpm,离心20分钟,取上清;
4、上清液过c-18固相萃取柱。具体步骤是:80%甲醇(1ml)平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yi mi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存备用;
5、上样前加入ph7.4pbs缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,然后4度离心(8000rpm,15分钟),取上清并暂时保存于4度待用。
植物标本(*):
用预冷的 pbs (0.01mol/l, ph=7.2-7.4)冲洗组织,去除残留物质(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将*碎。将剪碎的组织与对应体积的 pbs(一般按 1:9 的重量体积比,比如 1g 的组织样品对应 9ml 的 pbs,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。*在 pbs 中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于 5000×g 离心 5~10 分钟,取上清检测。
牛奶:
用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
蜂蜜:
用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
培养的细胞:
a、动物细胞:用ph7.2-7.4的pbs稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
b、植物细胞:用ph7.2-7.4的pbs稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的方式,充分破碎细胞,以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
c、组织的细胞切割标本后,称取1g组织,加入9g的ph7.2-7.4左右的pbs,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用ph7.2-7.4左右的pbs小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。
尿液:
用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水:
用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
脑脊液:
用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
样本收集注意事项:
1、不能检测含nan3的样品,因nan3抑制辣根过氧化物酶的(hrp)活性。
2、标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3、我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献,自行设计合理的样本处理方法。
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