中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
sn/t 1902-2007
水果蔬菜中吡虫啉、吡虫清残留量的测定
高效液相色谱法
determination of imidacloprid and acetamiprid
residues in fruits and vegetables-hp lc
1范围
本标准规定了水果蔬菜中吡虫啉、吡虫清残留量的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于番茄、黄瓜、柑橘中吡虫啉、吡虫清残留量的检验。
2测定方法
2.1试样制备
将所取原始样品缩分出1 kg，取可食部分，经组织捣碎，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样，密封，并标明标记。
2.2试样保存
将试样于-18℃以下冷冻保存。
注：在试样制备过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
2.3方法提要
试样中残留的吡虫啉、吡虫清用乙腈提取，提取液经弗罗里矽柱净化，浓缩、定容后，用配有紫外检测器或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定。
2.4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。
2.4.1乙腈：hplc级。
2.4.2正己烷。
2.4.3丙酮。
2.4.4氯化钠：140℃烘烤4 h。
2.4.5吡虫啉标准品：纯度大于等于96%。
2.4.6吡虫清标准品：纯度大于等于96%。
2.4.7吡虫啉、吡虫清标准溶液：准确称取适量的吡虫啉、吡虫清标准品，用乙腈配制成100μg/ml的单个标准储备液，根据需要再用乙腈+水(30+70)稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。
2.4.8固相萃取柱，弗罗里矽柱(florisil)，体积3ml小柱，填充物500mg。
2.5仪器设备
2.5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
2.5.2振荡器。
2.5.3氮吹仪。
2.5.4旋转蒸发仪。
2.5.5漩涡混合器。
2.5.6微量注射器：100μl。
2.6测定步骤
2.6.1提取
称取25 g试样(精确至0.01 g)，置于250 ml具塞锥形瓶中，准确加入50.0 ml乙腈，放置2 h，振荡提取30 min后用滤纸过滤。滤液收集到装有5 g~7 g氯化钠的100 ml具塞量筒中，盖上塞子，剧烈振荡1min，在室温下静止10min，使乙腈相和水相分层。
从100 ml具塞量筒中吸取10.0 ml乙腈溶液，移入125 ml梨形瓶中，于50℃水浴中旋转浓缩至近干。加入10ml丙酮+正己烷(10+90)溶解。
2.6.2净化
将弗罗里矽柱用2 ml正己烷预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入样品溶液，弃去流出液。用5 ml，丙酮+正己烷(10+90)涮洗梨形瓶后淋洗弗罗里矽柱，弃去流出液。用10 ml丙酮+正己烷(20+80)分两次淋洗弗罗里矽柱，用15 ml刻度离心管接收洗脱液。将盛有洗脱液的离心管置于氮吹仪上，在50℃水浴下，氮吹至近干，用乙腈+水(30 +70)定容至2.0 ml，在漩涡混合器上混匀，经0.45μm滤膜过滤后，待测。
2.6.3测定
2.6.3.1液相色谱参考条件
a)色谱柱：ods-c18，5μm，250 mm×4 mm(内径)或相当柱；
b)色谱柱温度：40℃；
c)流动相：乙腈+水，梯度：0 min，(5+95)；15 min，(25+75)；20 min，(5+95)；
d)流速：1.0 mi/min；
e)检测波长：258 nm；
f)进样量：20μl。
2.6.3.2色谱测定
根据样液中被测农药残留限（xian）量要求，选定浓度相近的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液和待测液中农药的含量在仪器检测的线性范围内，按上述色谱条件进行测定，吡虫啉和吡虫清的保留时间约为13 min和15 min。标准品的液相色谱图参见附录a。
2.6.4空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。
2.7结果的计算和表达
按式(1)计算试样中吡虫啉、吡虫清的残留量，计算结果需将空白值扣除。
式中：
x——试样中吡虫啉、吡虫清含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
a——试样中吡虫啉、吡虫清的峰面积；
c——标准工作液中吡虫啉、吡虫清的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
v——样液最终定容体积，单位为毫升(ml)；
as——标准工作液中吡虫啉、吡虫清的峰面积；
m——最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。
3测定低限、回收率
3.1测定低限
本方法测定低限为0. 02 mg/kg.
3.2回收率
3.2.1番茄中吡虫啉、吡虫清的添加浓度及其回收率的实验数据：
——添加浓度在0.02mg/kg时，吡虫啉回收率为91.4%~109%，吡虫清回收率为95.5%~108%；
——添加浓度在0.05 mg/kg时，吡虫啉回收率为89.2%~ 101%，吡虫清回收率为90.0%~102%；
——添加浓度在0.10 mg/kg时，吡虫啉回收率为80.7%~88.5%，吡虫清回收率为85.5%~103%。
3.2.2黄瓜中吡虫啉、吡虫清的添加浓度及其回收率的实验数据：
——-添加浓度在0.02 mg/kg时，吡虫啉回收率为98.5%~ 106%，吡虫清回收率为94.0%~
106%；
——添加浓度在0.05mg/kg时，吡虫啉回收率为95.0%~106%，吡虫清回收率为90.0%~102%；
——添加浓度在0.10mg/kg时，吡虫啉回收率为81.4%~97.2%，吡虫清回收率为96.2%~109 %。
3.2.3柑橘中吡虫啉、吡虫清的添加浓度及其回收率的实验数据：
——添加浓度在0.02 mg/kg时，吡虫啉回收率为94.5%~102%，吡虫清回收率为90.0%~99.0%；
——添加浓度在0.05 mg/kg时，吡虫啉回收率为88.0%~98.4%，吡虫清回收率为84.4%~93.8%；
——添加浓度在0.10 mg/kg时，吡虫清回收率为84.9%~ 109%，吡虫清回收率为87.3%~99.5%。