duolink®pla 结果为蛋白质事件（表达、相互作用或修饰）提供了相对定量。因此，加入技术对照组，以及在可能的情况下加入生物对照组，是十分重要的。
技术对照：
每个 duolink®pla 实验中应该包含两个技术对照组。这包括：
1.分别省略一种一抗
用于检测每种一抗的非特异性结合
有助于确定最佳一抗效价
2.省略所有一抗
用于检测系统中 duolink®pla 探针的非特异性结合
生物对照：
除了技术对照外，强烈建议使用生物对照。阳性和阴性生物对照均可提供有价值的信息。
1.阳性对照：
用含已知蛋白表达、相互作用或修饰的单独样本来测试试剂
可诱导系统（如生长因子刺激、热休克等）的使用将提供duolink®pla信号的生物学相关性
2.阴性对照：
使用不表达蛋白质靶标的样品（例如敲除、沉默等）将提供一抗特异性的信息
使用不相关抗体（例如同种型 igg、非相互作用蛋白的抗体等）将提供关于duolink®pla 探针特异性的信息
使用阻止蛋白质相互作用或修饰的抑制剂将提供 duolink®pla 信号的生物学相关性
优化duolink®邻位连接实验的补充！
封闭液和抗体稀释剂：
duolink®封闭液和抗体稀释剂含有 duolink®pla 探针（plus和minus）。这些溶液已进行优化，可与duolink®pla试剂配合使用，以最大限度地减少抗体和检测寡核苷酸的非特异性结合。然而，在这些条件下，必须验证您的一抗与目标蛋白靶标的特异性结合。应通过 duolink®pla 单一识别实验，或者 if 或 ihc 来分别检测每种一抗。
如果您之前已经确定了用于if 或 ihc 染色的封闭液和/或抗体稀释剂，则这些溶液很可能也可用于 duolink®pla。在这些溶液中不应该使用来自与您的一抗相同物种的同种型 igg 作为封闭液，因为这将导致来自 duolink®pla 探针的错误信号。