酶免疫技术的发展
酶免疫测定具有高度敏感性、特异性,而且它的试剂比较稳定,操作简单且无放射性危害,特别是商品试剂盒和自动化仪器的应用,使其成为一种适用于各级检验部门的免疫标记技术。随着检验医学的不断发展,酶免疫测定的方法、技术也得到发展和更新,斑点-elisa、发光酶免疫测定、免疫印迹法、bas-酶联免疫吸附试验等方法不断得到应用。
(一)斑点-elisa
斑点-elisa的原理与elisa的区别在于用对蛋白质有*吸附力的硝酸纤维素膜代替塑料制品作为固相载体,酶作用底物后在硝酸纤维素膜上形成有色沉淀而使膜着色。它的灵敏度较一般elisa高6~8倍、可达ng水平,试剂用量小,不需其它设备条件。
(二)免疫印迹法
免疫印迹法是将电泳与elisa结合起来的一种方法。它先经十二烷基磺酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳将样品进行分离,通过转印将被分离的各区带原位转移到硝酸纤维素膜上,然后把印有蛋白质条带的膜当成包被抗原的固相载体,做酶免疫测定。所以它的方法分为电泳、转印、酶免疫测定三个阶段。免疫印迹法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样品组分的免疫学测定方法。
(三)发光酶免疫测定
发光酶免疫测定与一般eia的区别是酶所催化的底物是发光剂。产物不是一般eia的有色物质,而是发光产物,所发出的光可用特定的仪器测定。常用的酶是hrp和ap,hrp的发光底物有鲁米诺及衍生物、对-羟基苯乙酸;ap的底物为3-(2--螺旋金刚烷)-4-甲氧基-(3-磷酸氧基)-苯基-1,2-二氧乙烷和4-甲基伞形酮磷酸盐。
(四)bas-酶联免疫吸附试验
bas-酶联免疫吸附试验是将生物素-亲和素(bas)放大系统与elisa结合起来的一种技术。生物素(b)是一种小分子的生长因子,有两个环状结构,其中一个可以和亲和素结合,另一个可以和包括酶、抗原(抗体)的多种物质结合。亲和素(a)又称卵白素,有4个亚基,都可与生物素稳定结合,此为放大系统的关键,即有1个亲和素就能结合4个生物素,亲和素也可被酶标记。