货号：ms1516 规格：100 管/96 样
单宁含量试剂盒说明书 微量法
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，又称植物多酚。具有*的化学性质和 多种生理活性，如能与蛋白质、生物碱、多糖结合；能与多种金属离子发生络合或静电作用； 具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理：
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，在 760nm 处有大吸收峰。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸 馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 4ml× 1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 3ml × 1 瓶，4℃保存；
单宁的提取：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 蒸馏水），充分匀浆后转移到 ep 管中，80℃水浴提取 30min， 8000 g，25℃离心 10 min，取 上清液待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 760nm 处，蒸馏水调零；试剂一和试剂二 37℃预热 10min 以上；
2、操作表：
试剂名称（µl） 对照管 测定管
样本 5
蒸馏水 135 130
试剂一 35 35
混匀，室温静置 5min
试剂二 30 30
混匀，室温静置 30min，760nm 处读取吸光值 a，δ a=a测定- a对照，对照管只要做一管。
单宁含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 1.6418x + 0.0134；x 为标准品浓度(mg/ml)，y 为 δa (a测定 - a对照)。
2、按样本鲜重计算：
单宁含量（mg /g 鲜重）= [(δa - 0.0134) ÷1.6418 × v1] ÷（w × v1 ÷ v2）= 0.609 × (δ a - 0.0134) ÷ w。
3、按样本蛋白浓度计算：
单宁含量(mg/mg prot) = [(δa - 0.0134) ÷1.6418 × v1] ÷ (v1 × cpr) = 0.609 × (δa - 0.0134) ÷ cpr。
v1：加入样本体积，0.005ml；v2：加入提取液体积，1ml； cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w： 样本鲜重，g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.8209x + 0.0134；x 为标准品浓度（mg/ml），y 为 δa(a测定 - a对照)。
2、按样本鲜重计算： 单宁含量(mg/g 鲜重) = [(δa - 0.0134) ÷ 0.8209 × v1] ÷ (w × v1 ÷ v2) = 1.218 × (δa - 0.0134) ÷ w。
3、按样本蛋白浓度计算： 单 宁 含 量 (mg/mg prot)= [(δ a-0.0134)÷0.8209 × v1]÷(v1 × cpr)=1.218 × (δa-0.0134)÷cpr。
v1：加入样本体积，0.005ml；v2：加入提取液体积，1ml； cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w： 样本鲜重，g。
注意事项：
1、 δa 控制在 0.02 ~ 0.5 范围内，若δa 大于 0.5，将样本提取上清液用蒸馏水稀释 10 倍后检 测，计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、 标准曲线线性范围为：0.025mg/ml ~ 0.5mg/ml。
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