人白蛋白（alb）定量检测试剂盒（elisa）
定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白蛋白（alb）的浓度。
检测原理：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（elisa）。在预包被抗人白蛋白（alb）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白蛋白（alb）校准品和待测样本，再加入另一株hrp标记的抗人白蛋白（alb）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物a和b，底物在hrp催化下，产生蓝色产物，在终止液（2m硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（od值），吸光度（od值）与待测样品中人白蛋白（alb）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白蛋白（alb）的浓度。
试剂盒限制性：
1.仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2.在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3.跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4.使用试剂盒配套的样品稀释液。
5.如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6.待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排出该因素。
7.通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
技术提示：
1.混合蛋白溶液时，避免起泡。
2.加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3.合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4.使用自动洗板机时，加入一个30秒浸泡的步骤，可以提高检测精度。
5.底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
6.终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
7.实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
8.所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
试剂盒组成与保存：
未开封的试剂盒保存在 2-8 度，不得使用过期试剂盒。
组分
数量
主要成分
开封后储存
校准品
0.3ml/管
--
2-8℃14天
包被微孔板
96t/48t
预包被固相抗体
2-8℃14天
hrp标记抗体
10ml
hrp标记的检测抗体
2-8℃14天
样本稀释液
6ml
--
2-8℃180天
底物a
6ml
0.01%过氧化氢
2-8℃180天
底物b
6ml
0.1%tmb
2-8℃180天
终止液
6ml
2mol/l稀硫酸
2-8℃180天
20×浓缩洗涤液
25ml
0.05%tween20
2-8℃180天
说明书
1份
--
--
自封袋
1个
--
--
不干胶
2片
--
--
注：校准品浓度依次为：80、 40、 20、 10、 5、 2.5mg/ml。
其他用品：
1.酶标仪（450nm）
2.精密移液器及一次性吸头
3.蒸馏水
4.洗瓶或者自动洗板机
5.37℃水浴锅或恒温箱
6.500ml量筒
生物安全：
1.检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2.试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3.底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。
4.戴上防护手套，实验完成后che底洗手。
样品的采集和储存：
以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1.细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在-20℃以下，避免反复冻融。
2.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在-20℃以下，避免反复冻融。
3.血浆：肝素，edta，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本收集后，无法一次检测完毕，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
4.组织匀浆：用预冷的pbs (0.01 m,ph=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的pbs(一般按1: 9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9ml的pbs，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在pbs中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
5.细胞提取液：贴壁细胞用冷的pbs轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的pbs洗涤3次。每1×106个细胞中加入150-200μlpbs重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少pbs的体积)。将提取液于1500×g离心10分钟，取上清检测。
6.其他生物体液：1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
试剂准备：
1.使用前，所有的组分都要至少复温60min，确保充分复温到室温。
2.浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:20稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加19份的蒸馏水。
3.底物：底物液a和b，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。
操作程序：
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1.按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2.从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
设置标准品孔、0值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μl，0值孔加样本稀释液50μl，空白孔不加，样本孔加待测样本50μl。
3.除空白孔外，标准品孔、0值孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（hrp）标记的检测抗体100μl。
4.用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
6.将底物a和b按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μl。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
7.所有孔加入终止液50μl，在酶标仪上读取各孔吸光度（od值）。
结果计算：
1.以标准品浓度做为纵坐标（6个标准品孔，加1个0值孔，共7个浓度点），对应的吸光度（od值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（od值），利用方程计算样品的浓度值。
2.如果样品被稀释，通过上述方法测的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。
试剂盒性能指标：
1.物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2.剂量反应曲线线性
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。
3.精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 cv%小于10%。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数cv%小于 15%。
4.灵敏度
zui低检出剂量小于0.1mg/ml。
5.回收率
三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在85%-115%之间。
6.特异性
本试剂盒识别天然和重组人白蛋白（alb），与结构类似物无交叉。
7.稳定性
2-8℃保存，有效期6个月。
8.检测范围
2.5mg/ml – 80mg/ml。