流式细胞术是一种基于检测设备-流式细胞仪,对悬浮的单个活细胞或颗粒进行快速、多参数检测分析的一项生物学前沿技术。自20世纪60年代后期发展起来后,已在生物医学领域得到了广泛的应用,免疫相关的科研实验室流式检测已成为研究手段,而临床的流式则成为了自基因诊断技术以来又一崭新的高技术检测方法。
那么为了得到一个真实可靠、准确灵敏的实验结果,都有哪些必然的要素呢?我们把这些影响的因素归纳为流式细胞术实验的三大要素,分别为:流式试剂的搭配、检测样本的制备、流式仪器的应用。今天带大家来认识下这三位流式界的好朋友
荧光标记抗体的搭配
在流式细胞术的免疫分型检测中,有各种荧光素偶联的抗体需要进行选择,特别是对于多色实验来说,对荧光素的选择搭配有着很高的要求,搭配效果直接影响到检测效果,那么我们根据什么来进行选择呢?
首要硬性条件-流式细胞仪的配置,流式细胞仪的激光器和滤光片配置决定了我们可以选择的偶联荧光标记的种类与数目。
目标蛋白条件-染料的亮度与抗原表达量相适应,目标蛋白的表达水平或丰度决定了荧光素的搭配。低表达的抗原,推荐搭配高亮度荧光素;高表达的抗原,推荐搭配低亮度荧光素。
荧光素条件-荧光素之间的光谱重叠最小化,我们需要尽量选择光谱重叠小的荧光素组合,光谱重叠严重的荧光素同时检测会导致荧光溢漏,干扰检测结果,需调节补偿后才能进行准确分析;还可优先选择不同激光激发的荧光素组合,如fitc搭配apc、pe搭配apc。