许多病毒都是rna病毒，如新型管状病毒。上通行的检测方法是rt-qpcr方法。这就离不开rt-qpcr mix。下面给您介绍的这款mix值得关注，因为它可用于新guan病毒研究检测（不用于诊断），是其中的一个重要组分。
一、用途
rna病毒检测试剂盒（rt-qpcr法）（英文名：conviflex™rt-taq mix）用于定性检测和分析rna病毒和rna分子，特别适合检测新guan病毒等此类病毒。
二、描述：
1.该试剂盒为实时定量qpcr（rt-qpcr）rna病毒检测试剂盒。
2. 试剂盒由两种组分组成：
组分1. conviflex™ rt-taq mix的冻干粉包含：mulv逆转录酶、taq聚合酶及dntp。
其中mulv逆转录酶，来自小鼠白血病病毒（m-mulv）并经过基因修饰。
这里的taq聚合酶另兼具热启动功能。
此taq酶在室温下，活性被抗体所抑制，当温度达到70°c以上时，才会被*激活。
在70°c 以下时，由于taq酶没有*活化，因此实验不会产生非特异性pcr产物和引物二聚体。热启动taq酶的使用可使pcr具有更高的特异性和灵敏度。
3. 试剂盒使用时，先用复溶缓冲液溶解冻干粉，再加入自备的rna模板和引物。
*使用mb公司提供的新guan病毒的引物/探针（英文名：sars-cov-2 confirm，货号271-2100）
4. 该试剂盒适合大多数rt-qpcr体系和qpcr仪类型。关于实验使用的jia体积、浓度、温度和孵育时间，本文有相应的建议，但实验室仍可依据自己的分析要求作相应调整。
三、产品特点：
1. 冻干粉为逆转录酶和taq酶的预混液，将rna逆转录与qpcr扩增两个过程合并，一步完成，减少移液次数、避免交叉污染、操作简单，节约时间。
2. taq酶具有70°c热启动功能，显著提高试剂盒的特异性和敏感度。
3. 主要组分为冻干粉，4℃保存，储存运输方便，性能稳定。
四、需用户自己准备的试剂耗材和仪器：
1. 引物、探针（可选）
*mb公司提供的新guan病毒的引物/探针（英文名：sars-cov-2 confirm，货号271-2100）
2. 荧光定量pcr仪（qpcr仪）
3. 无dnase和rnase的qpcr反应管
4. 离心机
5. 移液器及带滤芯吸头（不含dnase和rnase）
6. 用户自己的样品。
五、样本制备说明：
1. 来自于真核细胞、原核细胞、病毒的rna以及体外转录的rna，均可用于检测。
2. 制备的rna必须不含rt-qpcr抑制剂，例如有机溶剂等。
3. 尽量减少rna样品的冻融次数，同时避免rna酶污染，以减少rna降解的风险。（rna降解会极da地限制了rt-qpcr反应的性能）
4. 样本制备过程中，注意避免其他dna的污染，dna的干扰也会降低qpcr的准确性。
建议采用商品化的rna提取试剂盒预先处理待检物（如拭子、活检组织、哺乳动物细胞和细菌），例如mb厂家的：
【rna小提试剂盒】（英文名：extractnow™ rna mini kit，货号603-1050）
【病毒rna提取试剂盒】
(英文名：extractnow™ virus rna kit, 货号611-1010/-1050/-1250)
或使用其他已建立的方法。
六、操作注意事项：
该试剂盒应仅由经过培训的实验室人员使用。始终穿上合适的防护fu和戴一次性手套。
根据样品类型，应谨慎处理所有样品。该试剂盒不含有害物质。残余物可以根据当地法规丢弃。
七、操作步骤
步骤1.冻干粉conviflex™rt-taq mix，大速离心5秒钟，然后加入260μl复溶缓冲液2×rehydration buffer，室温静置5分钟后，涡旋并离心5秒钟，分装，待用或-18℃保存。
步骤2.每个反应体系为20µl，其中反应mix为15µl。
（1）依据本次试验样本数，制备rt-qpcr的反应mix。
1个反应mix需要：
①conviflex™ rt-taq mix（即上面复溶的预混液）10µl，
②引物（浓度0.1 - 0.5 µm）
③探针（浓度0.1 - 0.5 µm）
④pcr级水（使每管总体积为15µl）
注：引物和探针的*浓度范围是0.1-0.5 μm。
通常，引物浓度过高，会增加引物错配和非特异rt-pcr产物。然而，当rt-pcr程序运行时间较长或使用简并引物时，则*引物浓度升高至1 μm。（注意：若使用简并引物，同一rt-pcr分析中，引物之间应具有相同的熔解温度）
（2）将反应mix涡旋并离心5秒钟。
（3）每个pcr管中加入15μl反应mix和5μl样本（抽提后的rna），
或5μl rna提取试剂盒中的洗脱缓冲液，作为阴性对照，或5μl pcr级水作为无模板对照，或5μl阳性对照。
（4）扣紧pcr管，然后短暂离心。
（5）将pcr管放置qpcr仪上，盖好盖。
步骤3.在qpcr仪上设置反应程序，
示例: 1 cycle 50 °c for 20 min
1 cycle 95 °c for 10 min
45 cycles 95 °c for 15 sec
60 °c for 1 min
(以上程序仅依据厂家经验，用户可根据实际情况调整温度和孵育时间)
步骤4.启动程序
八、使用注意事项：
1. 使用前应认真阅读说明书。
2. 来自不同批次的试剂不能混合。
3. 试剂盒内的试剂应始终作为一个整体溶解分装。
4. 试剂盒应在效期内使用。
5. 每次pcr至少应设置一个阳性对照。每次pcr至少应设置一个阴性对照和/或一个无模板对照。如果实验者自己抽提rna，则可使用洗脱缓冲液作为阴性对照。对照必须与待测样品的处理方式相同。您也可能需要其他实验室提供的对照品，例如含高、中、低不同浓度的rna样品。使用对照，对于确认结果的可靠性或用于排除故障非常有意义。
6. 建议在无rna和dna污染的条件下进行rt-pcr，以避免操作过程中dna或非特异rna的交叉污染。（mb公司*使用pcr污染祛除喷雾，英文名：pcr clean™，货号15-2025，预先清洁实验环境。）
7. rna模板浓度，应依据提取rna的质量、来源、感兴趣基因的相对丰度、以及是否为低拷贝基因，来调整优化。
8. 该试剂盒建议逆转录步骤的温度为50°c。但这个温度及持续时间可根据实验室自己的分析要求进行优化，以增强反应的性能。