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人源细胞实验结果误判原因

人源细胞提供的对实验结果判定说明是接种细菌于37℃培养24h,滴加v-p甲、乙液后在30min内观察结果,变红色为实验阳性,不变色为阴性。然而在实际工作中,此方法会造成一些实验结果的误判,并不是所有的细菌都适用上述判定方法。
v-p实验常用于细菌检测,可检验细菌利用葡萄糖产生中性乙酰甲基甲醇的能力,在碱性环境下,乙酰甲基甲醇被空气中氧气氧化成二乙酰,二乙酰与培养基内蛋白胨中*所含有的胍基反应可生成红色化合物。
蜡样菌v-p培养基培养24h,滴加甲、乙液后30min内呈现阳性,证明试验用v-p培养基无质量问题。单增菌v-p培养基分别于30℃和37℃培养24h、48h、72h、96h,实验结果如下表。通过实验我们发现两种现象。其一,单增菌培养的时间短,出现阳性结果慢,随着培养时间延长,阳性结果出现的时间缩短。其二,48h内,单增菌于30℃培养要比在37℃培养阳性结果出现的快些。
究其实验原理,v-p实验显色不同于糖醇类培养基颜色变化,因其中所含指示剂变化特别灵敏。该实验zui终出现红色物质与二乙酰的含量有直接关系,二乙酰含量大,它与胍基生成的红色物质就多,观察到培养基显红色的速度就快,二乙酰含量少则反之。试验中,随着培养时间的延长,单增菌利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量越来越多,乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰的含量也就越来越多,从而阳性结果显现的时间随之缩短。相对于37℃,单增菌于30℃培养更适宜生长,并且在相同的培养时间内,其利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量更多些,尤其48h内表现得更为突出。
从人源细胞大量的实际工作中发现,有些细菌的生化实验不应*按照试剂盒说明书的方法去做,应参考其生物学特点,在必要时做出适当的调整,才能得到更加可信、满意的实验结果。正如上述实验,若按试剂盒提供的结果判定说明,培养72h内的阳性结果均超过30min,理应判定为阴性,而单增菌更适宜于30℃生长,且生长缓慢,从而v-p实验需要适当的延长培养时间,4h内观察结果为宜,所以不能轻易地判定为阴性。
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