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美国必能信超声波破碎仪讲解细胞的4种破碎方法-广州中善

美国必能信超声波破碎仪用于粉碎动植物细胞、细菌、孢子或组织,提取细胞中的蛋白质,进行病毒和疫苗的科学培养实验。它利用强超声波在液体中产生空化效应,对物质进行超声波处理,从而为实验室应用带来行业内的样品处理解决方案。
细胞破碎方法:
1、机械破碎法:指使用捣碎器、研磨机或均质机破碎细胞。
1、高速组织捣碎:将材料混合成稀糊状,放入约1/3体积的圆筒中,盖紧圆筒,先将调速器调到最慢位置,然后启动开关,逐渐加速到所需速度。该方法适用于动物内脏、植物肉质种子等。
2、用玻璃匀浆器匀浆:首先将切好的组织放入试管中,然后放入研磨棒中来回研磨,上下移动研磨细胞。这种方法比高速组织捣碎器具有更高的细胞破碎程度,并且适用于少量的动物器官和组织。
二、物理破碎法:是指利用温差、压差或超声波破碎细胞。
1、用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞剧烈震荡破碎(细胞壁和细胞器因超声波的振动力而破碎)。机理:可能与强声波作用于溶液时气泡产生、长大、破裂的空化现象有关,空化现象产生的冲击波和剪刀力引起细胞裂解。超声波破碎的效率取决于音频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。(使用时注意冷却,防止过热)。
2、高压破碎:细胞悬浮液从高压室的环形间隙喷射到静止的冲击环上,并被迫改变方向,通过出口管流出。在此过程中,细胞经历了由高速和从高压到常压的变化引起的剪切碰撞,从而破裂并释放出内含物。这是温和而地破碎细胞的理想方法。
3、反复冻融法:将细胞冷冻在-20以下,室温融化。反复地,由于细胞中冰粒的形成和剩余细胞液的盐浓度的增加,细胞膨胀,这破坏了细胞结构。
三、化学破碎法:指用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜,使细胞膜结构被破坏或通透性改变。十二烷基磺酸钠(sds)和脱氧胆酸钠可损伤一些动物细胞,如肿瘤细胞。一般浓度为1mg/ml。
4、酶法破碎法:选择合适的酶破坏细胞壁,然后在低渗溶液中破碎原生质体。
细菌的细胞壁比较厚,可以用进行更好的治疗。
裂解物的标准配方:50 mm tris-hcl (ph 8.5 ~ 9.0),2 mm edta,100 mm nacl,0.5% tritonx-100,1 mg/ml。(在这个ph范围内效果很好)。
总结:无论采用哪种方法破碎组织细胞,细胞内的蛋白质或核酸水解酶都会释放到溶液中,导致大分子生物降解,造成天然产物减少。加入氟磷酸二异丙酯(dfp)可以抑制或减缓自溶。碘乙酸的加入可以抑制活性中心需要疏水基团的蛋白水解酶的活性,苯(pmsf)的加入也可以消除蛋白水解酶的活性,但不是全部,粉碎的同时要分几次加入。此外,通过选择ph、温度或离子强度,这些条件应该适合于目标物质的提取。
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