elisa分析检测试剂盒酶和酶作用的底物
1.辣根过氧化酶（hrp）：hrp在蔬菜作物辣根中含量很高，纯化方法也不复杂。它是一种糖蛋白，含糖量约18%；分子量为44kd；是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有zui高吸收峰；辅基是深棕色的含铁卟啉环，
在403nm波长处有zui高吸收峰。hrp对受氢体的专一性很高，除h202外，仅作用于小分子醇的过氧化物和尿素的过氧化物。后者为固体，作为试剂较h202方便。
许多化合物可作为hrp的供氧体，在elisa中常用的供氢体底物为邻苯二胺（opd）、四甲基联苯胺（tmb）和abts.opd为在elisa中应用zui多的底物，灵敏度高，比色方便。牛elisa试剂盒其缺点是配成应用液后稳定性差，而且具有致异变性。tmb无此缺点。tmb经酶作用后由无色变蓝色，目测对比鲜明；加酸停止酶反应后变黄色，可在比色计中定量；因此应用日见增多。abts，虽然灵敏度不如0pd和tmb，但空白值很低。
2.碱性磷酸酶（ap）：elisa试剂盒是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的ap分子量为80kd，酶作用的zui适ph为8.0；用小牛肠黏膜提取的ap分子量为l00kd，zui适ph为9.6.一般采用对**苯***（p-npp）作为底物。它可制成片状试剂，使用方便。产物为黄色的对**酚，在405nm有吸收峰。用naoh终止酶反应后，黄色可稳定一段时间。
在elisa中应用ap系统，其敏感性一般高于应用hrp系统，空白值也较低。但由于ap较难得到高纯度制剂，稳定性较hrp低，价格较hrp高，制备酶结合物时得率较hrp低等原因，国内在elisa中一般均采用hrp.3.其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。β-半乳糖苷酸的底物常用4-甲基伞基-β-半乳糖苷，经酶水解后产生荧光物质4-甲基伞酮，可用荧光计检测。荧光的放大作用大大提高了方法的敏感度。ap也可应用可产生荧光的伞基***作底物。其缺点是需要荧光计测定，而且如用固相载体直接作为测定容器，此载体不可发出荧光。脲酶的特点是酶作用后反应液发生ph改变，可使指示剂变色；另外，在人体内没有内源酶。
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