的提炼
提纯工艺流程如图5-1所示。
图5-1提纯工艺流程
不稳定,发酵液预处理、提取和精制过程要条件温和、快速,防止降解。
(1)预处理
发酵液形成后,目标产物存在于发酵液中,而且浓度较低,如抗生素只有10~30kg/nm*,含有大量杂质,影响后续工艺的有效提取。因此必须对其进行预处理,其目的在于浓缩目的产物,去除大部分杂质,改变发酵液的流变学特征,利于后续的分离纯化过程。
(2)过滤
发酵液在萃取之前需预处理,发酵液加少量絮凝剂沉淀蛋白质,然后经真空转鼓过滤或板框过滤,除掉茵丝体及部分蛋白质。易降解,发酵液及滤液应冷却至10℃以下,过滤液收率般为90%左右。
①若菌丝休粗长,可采用鼓式真空过滤机过滤,滤盗形成紧密饼状,容易从滤布上刮下。滤液ph为6.27~7.2,蛋白质含量为0.05%~0.2%,需要进步除去蛋白质。
②改善过滤和除去蛋白质的措施:硫酸调节ph为4.5~5.0,加入0.07%溴代十五烷吡啶(ppb),0.7%硅藻土为助滤剂。再通过板框式过滤机。滤液澄清透明,进行萃取。
(3)萃取
的提取采用溶媒萃取法。游离酸易溶于有机溶剂,而盐易溶于水。利用这性质,在酸性条件下转入有机溶媒中,调节ph,再转入中性水相,反复儿次萃取,即可提纯浓缩。选择对分配系数高的有机溶剂,工业上通常用乙酸丁酯和戊酯,萃取2~3次。从发酵液萃取到乙酸丁酯时,ph选择为1.8~2.0。从乙酸丁确反萃取到水相时,ph选择为6.8~7.4,发酵滤液与乙酸丁酯的体积比为(3.5~4.0):1。反萃取时,ba萃取液与溶液的比例为(4~5):1。几次萃取后,浓缩10倍,浓度几乎达到结晶要求。萃取总收率在85%左右。
所得滤液多采用二次苯取,用10%硫酸调ph为2.0~3.0,加入乙酸丁酯,用为滤液体积的四分中的员,反萃取时常用溶液调ph为6.8~7.2,在次丁酯萃取时,由于滤液含有大量蛋白,通常加入破乳剂防止乳化。次萃取因存在蛋白质,要加
0.05%~0.1%乳化剂ppb。
萃取条件:为减少降解,整个萃取过程应在低温下(10℃以下)进行。萃取罐用冷冻盐水冷却。
(4)脱色
萃取液中添加活性炭,除去色素、热源,过法,除去活性炭,
(5)结晶
萃取液般通过结晶提纯。钾盐在乙酸丁酯中溶解度很小,在二次丁酯萃取液中加入错酸钾-乙醇溶液,钾盐就结品析出。然后采用重结品方法,进步提高纯度,将钾盐溶于koh溶液,调ph至中性,加无水丁醇,在真空条件下,共沸蒸馏结晶得纯品。直接结晶:在2次乙酸丁隋萃取液中加醋酸钠-乙醇溶液反应,得到结晶钠盐。
加-乙醇溶液,得到钾盐。
共沸蒸馏结晶:萃取液,再用0.5mol/lnaoh萃取,ph为4.8~6.4时得到钠盐水浓缩液。加2.5倍体积丁醇,于16~26℃,0.67~1.3kpa下蒸馏:水和丁醇形成共源物而蒸出,钠盐结晶析出。结晶经过洗涤、干燥后,得到青待素产品。
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