实验前准备：
仔细阅读使用说明书。
计算待使用nh2-reactive biotin的量。
1.提前20 min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（注：不需要用到的nh2- reactive biotin继续放置冰箱中）。
2.溶解nh2-reactive biotin：加入30 μl dmf至nh2-reactive biotin瓶中，静置10 min，待其充分溶解，此时生物素的浓度为10 mm。
操作步骤：（本操作步骤按照1 mg的量进行标记）
1.取1 mg待标记抗体于filtration tube中，并加入相应体积的labeling buffer至总体积为0.5 ml，12,000 × g离心10 min。（注：①filtration tube的最大体积为0.5 ml。②待标记抗体浓度低时，可先超滤离心一次。）
2.加入13.3 μl nh2-reactive biotin和适量labeling buffer至上述filtration tube中，使抗体的终浓度为2 mg/ml，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30 min。
3.12,000× g离心10 min。
4.加入适量labeling buffer至上述filtration tube中，使终体积为0.5 ml，并轻轻吹打混匀，12,000× g离心10 min。并重复操作一次。
5.加0.2 ml labeling buffer至filtration tube中，轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6,000× g离心10 min。
6.收集离心管中的溶液，即为生物素标记的抗体。
注意事项：
1.本试剂盒也可标记其它含有氨基（nh2-）的抗原、hrp、多肽，具体标记比例根据待标记物中氨基的数量确定。
2.dmf要密封干燥保存，使用完立即用封口膜封紧。
3.操作步骤5中，可用labeling buffer作为回收标记抗体的缓冲液，也可使用其它任何缓冲液或保护剂。
4.本试剂盒未开封前的有效期为一年，请在有效期内使用。
5. 本试剂盒提供的为10 kda的filtration tube，标记抗原或多肽请注意分子量的大小。
6.在步骤2中，标记其它抗体时，我们应先控制抗体的终浓度为2 mg/ml，然后再根据抗体的量计算应加入nh2-reactive biotin的体积。