1 问:panaceagel是什么?
答:panaceagel是化学合成的肽水凝胶,ph为中性。该凝胶为透明、生物可降解、3d网络支架,不包含任何生物来源的成分,小瓶盛装。
2 问:panaceagel是什么材质的?
答:panaceagel100%是由13个天然氨基酸化学合成的肽。原子力显微镜(afm)和电镜(sem,tem)观察也发现,水溶液中小肽根据天然3d网状结构自发组装成纳米纤维。由合成肽和碳酸钠调节水凝胶ph值,约8.5%的海藻糖作为等渗试剂调节渗透压。
3 问:panaceagel刚性如何?
答:随着肽浓度和混合物中盐浓度变化,panaceagel刚性不断变化。培养细胞分泌的细胞外基质也会影响其机械强度。例如流变学测量显示,以2:1的比例混合panaceagel(0.4%)和dmem(dulbecco's modified eagle medium),储能模量(g’)和损耗模量(g’’)分别为97.0 ± 2.1 pa 和 15.3 ± 1.4 pa。
4 问:panaceagel需要灭菌么?
答:发货前panaceagel已经经过高压灭菌。无需进一步灭菌。
5 问:如何储存panaceagel?
答:panaceagel需在4-25℃避光保存。
6 问:室温条件下panaceagel稳定性如何?
答:未开封的panaceagel在4-25℃时保存在黑暗处能放置6个月。长期稳定性研究正在进行中。
7 问:panaceagel应用于细胞悬液时需进行任何预处理么?
答:不需要。panaceagel的ph为中性,所以用于细胞悬液时无需再平衡。二者极易混合,但液体混合时一定要迅速,因为panaceagel只要暴露于培养基中的盐中流动性就会大大降低。
8 问:panaceagel能用于何种细胞?
答:已经使用panaceagel成功培养了以下细胞:
小鼠骨骼肌细胞(c2c12)
大鼠骨骼肌细胞(l6)
小鼠成纤维细胞(nih3t3)
人成纤维细胞(tig-1)
人软骨肉瘤细胞(oums-27)
新生的心肌细胞(直接分离得到)
9 问:panaceagel和其他细胞三维培养材料有何异同?
答:参考下表
panaceagel
胶原collagen
生物可降解聚合物
biodegradable polymer
来源
合成
动物源性
合成
刚性
中等
中等
硬
ph
中性
中性、酸性
中性
生物亲和性
良好
良好
透明度
高
高
低
10 问:实验中如何选择panaceagel使用浓度?
答:有两种浓度的panaceagel,分别为0.4%和0.8%。初始实验,推荐将0.4%的panaceagel和细胞悬液以1:1的比例等体积混合,获取panaceagel终浓度为0.2%。0.8%的panaceagel能用于制作更高硬度的水凝胶。根据细胞类型不同,panaceagel和细胞的密度也不同。
11 问:在panaceagel中如何培养细胞?
答:参考试验步骤。
12 问:使用panaceagel时需要特殊装置么?
答:不需要
13 问:生长条件和限制是什么?
答:细胞终浓度为5×105~1×106cells/ml,对大多数类型细胞都可以选择普通培养基。panaceagel 3d培养细胞厚度不超过2mm。
14 问: panaceagel用过的细胞能再次培养么?
答:可以。破坏支架后通过移液能释放细胞并再次培养。
15 问:如何将生物活性物质整合到panaceagel中(小肽,生长因子等)?
答:生物活性物质能添加到培养基或细胞悬液中。如果加入培养基中,生物活性物质必须在30分钟内浸润并抵达细胞。若添加到细胞悬液中,需保持生物活性物质适浓度。
16 问:能否在panaceagel表面培养细胞?
答:可以。添加细胞悬液前,panaceagel能包被培养皿、插件、孔板或其他细胞培养盘。加入细胞悬液时操作要轻柔,避免搅动。
17 问:panaceagel 3-d培养的细胞下游分析有哪些?
答:我们已成功进行过以下实验:
-用dapi 或pi或钙黄绿素染细胞测免疫活性
-荧光试剂染色后进行dna 计数
-western blot分析
-免疫染色
-sem
-tem
18 问:panaceagel3d 培养的细胞能移植到体内进行分析么?
答:满载细胞的panaceagel能植入活体动物组织中,进行专门活体研究。panaceagel本身是生物可降解的,体外研究中表明无毒性。