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猪传染性胃肠炎病毒抗体(TGEV)Elisa试剂盒作用分析

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猪传染性胃肠炎病毒抗体(tgev)操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240u/l
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
120u/l
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
60u/l
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
30u/l
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
15u/l
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
猪传染性胃肠炎病毒抗体(tgev)计算
以标准物的浓度为横坐标,od值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的od值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
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