细胞转染常用的转染试剂很多，其中，lipo3000深受广大科研工作者的喜爱，那我们来看看lipo3000细胞转染的实验步骤及注意事项吧！
一、实验前准备
lipofectamine™ 3000转染试剂（thermo fisher）、opti-mem（可以用无血清的培养基代替）
二、实验步骤
1.接种细胞，使其在转染时达到70–90%汇合度。
注：对于hek293，6孔板一般铺50万个细胞左右。对于pc9, 24孔板一般铺5-10万个细胞。由于不同细胞，生长状况不太一样，需要根据情况调整。
2.使用opti-mem™培养基稀释lipofectamine™ 3000试 剂，充分混匀。
3.使用opti-mem™培养基稀释dna，制备dna预混液，然后添加p3000™试剂，充分混匀。
4.将上面两步溶液合在一起，混匀并孵育10-15mins。
5.将混匀后的溶液加入到细胞培养基中，并轻轻摇晃培养基，使其均匀。
6.37°c孵育细胞2–4天，然后分析转染细胞。
转染量：
组分
96孔
24孔
6孔
dna/孔
100ng
500ng
2500ng
p3000tm/孔
0.2μl
1μl
5μl
lipofectamine™ 3000/孔
0.15和0.3μl
0.75和1.5μl
3.75和7.5μl
三、注意事项
1.opti-mem需要37℃水浴锅预热。
2.转染sirna至细胞时，在稀释sirna时不要加入p3000™试剂。
3.关于lipo3000的用量，比如6孔板推荐用量有两个3.75ul和7.5ul，最di看转染xiao率，最高看细胞耐受。
4. opti-mem与lipo3000预混及opti-mem、质粒及p3000预混，都不需要各自孵育，而且两者混合后孵育时间最多不要超过15mins。
5.转染中和转染后的细胞培养基中最好不要含有双抗。
对于比较好转染的细胞，如hek293，而且需要大量转染的时候，可以使用pei进行转染，毕竟lipo3000比较贵。例如，在做co-ip实验时，需要10cm皿转染好几种质粒，就可以用pei进行细胞转染。co-ip步骤见免疫共沉淀co-ip实验步骤。
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